Implementación de un método molecular para la identificación de Mycoplasma pneumoniae resistente a macrólidos / Implementation of a molecular method for the detection of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae

Introducción: Mycoplasma pneumoniae es causa frecuente de infecciones respiratorias en niños y jóvenes. Los macrólidos son la primera línea de tratamiento. La rápida emergencia de resistencia a estos antimicrobianos ha motivado el desarrollo de métodos moleculares para su detección en muestras clínicas positivas a este patógeno. Objetivo: Implementar un método de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) para la detección de resistencia a macrólidos a partir de muestras clínicas positivas a M. pneumoniae. Métodos: Se implementó una RT-PCR para la detección de las mutaciones A2058G y A2059G en el ARNr 23S de M. pneumoniae. Se analizaron 24 muestras clínicas positivas a M. pneumoniae, que provenían de pacientes con síntomas respiratorios. Se evaluó la sensibilidad, especificidad, repetibilidad y reproducibilidad de la RT-PCR. Resultados: La RT-PCR mostró un 100 % de especificidad para M. pneumoniae y un 92 % de sensibilidad, con un límite de detección de 2 copias/µL, que equivale a 10 copias/reacción. Además, se demostró la reproducibilidad y repetibilidad de estos resultados. Se obtuvo una correcta identificación de los genotipos salvaje y mutante, correspondientes a cada control. De las muestras clínicas positivas a M. pneumoniae, el 77,3 % (17/22) se identificó como sensible a macrólidos y el 22,7 % (5/22) como resistente. Conclusiones: La alta sensibilidad y especificidad del método de RT-PCR implementado permite que el Laboratorio Nacional de Referencia de Micoplasmas del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí cuente con un método eficaz para el diagnóstico de M. pneumoniae resistente a macrólidos.

Introduction: Mycoplasma pneumoniae is a common cause of respiratory track infections in children and young adults. Macrolides are the first-line treatment. The rapid emergence of resistance to these antimicrobials has motivated the development of molecular methods for their detection in clinical samples positive for this pathogen. Objective: To implement a real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) method for the detection of macrolide resistance in M. pneumoniae positive clinical samples. Methods: An RT-PCR was implemented to detect mutations A2058G and A2059G in 23S rRNA of M. pneumoniae. M. pneumoniae positive clinical samples from 24 patients with respiratory symptoms were analyzed. Sensitivity, specificity, repeatability and reproducibility of the RT-PCR assays were evaluated. Results: The RT-PCR assays showed 100% specificity to M. pneumoniae, and 92% sensitivity with a detection limit of 2 copies/µL, equivalent to 10 copies/reaction. Moreover, the repeatability and reproducibility of these results were demonstrated. Wild and mutant genotypes associated to each control were properly identified. Of the clinical samples positive for M. pneumoniae, 77.3% (17/22) were macrolide-sensitive and 22.7% (5/22) were macrolide-resistant. Conclusions: The high sensitivity and specificity of the RT-PCR method implemented provides the National Reference Laboratory of Mycoplasmas of the Institute of Tropical Medicine Pedro Kourí with an effective method for the diagnosis of macrolide-resistant M. pneumoniae.

Identificación de microorganismos vaginales en pacientes en trabajo de parto pretérmino / Identification of vaginal microorganisms of patients in preterm labor

Resumen OBJETIVO: Identificar los microorganismos vaginales más frecuentes en pacientes en trabajo de parto pretérmino, mediante el A.F. Genital System-Liofilchem®. MATERIALES Y MÉTODOS: Estudio descriptivo, prospectivo y transversal llevado a cabo en pacientes en trabajo de parto pretérmino atendidas en el servicio de Ginecología y Obstetricia de la Fundación Hospital Infantil Universitario de San José de Bogotá, entre julio de 2015 y febrero de 2016 de quienes se obtuvieron muestras de flujo del introito vaginal y se sembraron en el panel del A.F. Genital System-Liofilchem®, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para el análisis de los datos se utilizó el programa estadístico Stata versión 13 (StataCorp®) y se implementó la prueba no paramétrica de Wilcoxon. RESULTADOS: Los microorganismos aislados con mayor frecuencia fueron: Staphylococcus aureus (89.1%), Ureaplasma urealyticum (43.4%) y Mycoplasma hominis (19.5%). De las muestras positivas para especies de micoplasma, 52.2% tuvo concentración mayor de 105 UFC/mL. De los agentes aislados, Ureaplasma urealyticum y Mycoplasma hominis mostraron resistencia de 100% para clindamicina y eritromicina, respectivamente. CONCLUSIONES: Los microorganismos vaginales representan un factor de riesgo de parto pretérmino. Ureaplasma urealyticum y Mycoplasma hominis muestran resistencia total a clindamicina y eritromicina.

Abstract OBJECTIVE: Determine the frequency of microorganisms present in the vagina of women in preterm labor. MATERIALS AND METHODS: Descriptive, prospective, cross-sectional study of a series of cases of 46 patients treated at the Fundación Hospital Infantil Universitario de San José de Bogotá for preterm labor, who were sampled from the vaginal introitus and planted on the A.F. Genital System-Liofilchem® panel. Genital System by Liofilchem®, according to the manufacturer's instructions. The statistical package Stata version 13 (StataCorp®) was used. The statistical analysis was descriptive, the nonparametric Wilcoxon test was run. RESULTS: The most isolated microorganism was Staphylococcus aureus with a frequency of 89.13%. Ureaplasma urealyticum was detected in 43.48% and Mycoplasma hominis in 19.57 Of the positive samples for genital Mycoplasmas, 52.2% showed a concentration >105 CFU/mL. Ureaplasma urealyticum isolates showed 100% resistance to clindamycin and 100% Mycoplasma hominis for erythromycin. CONCLUSIONS: Microorganisms that have been identified as risk factors for preterm delivery were identified in 93.5% of the vaginal discharge samples. For Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis, 100% resistance for clindamycin and erythromycin is identified.

Diagnóstico de Mycoplasma genitalium por amplificación de los genes MgPa y ARN ribosomal 16S / Diagnosis of Mycoplasma genitalium by MgPa and rRNA 16S gene amplification

OBJETIVO: El microorganismo Mycoplasma genitalium se ha relacionado con la uretritis no gonocócica (UNG). La técnica de PCR se ha convertido en el principal método de detección de este patógeno. En consecuencia, debe aplicarse un método de diagnóstico mediante la amplificación de fragmentos de ADN por la técnica PCR. MATERIAL Y MÉTODOS: Se seleccionaron los cebadores MGF-MGR y MgPaF-MgPaR, complementarios de los genes de ARNr 16S y MgPa de M. genitalium, respectivamente. Se efectuaron ensayos de especificidad y sensibilidad y se estudiaron muestras clínicas. RESULTADOS: La PCR con cada grupo de cebadores utilizado fue específica sólo para M. genitalium y la sensibilidad fue mayor con el grupo de cebadores MGF-MGR. En el estudio de 34 muestras clínicas, 18.5 por ciento fue positivo a M. genitalium y se encontró un mayor número de muestras positivas al utilizar los cebadores MgPaF-MgPaR. CONCLUSIONES: Debe aplicarse en la práctica clínica el diagnóstico de M. genitalium mediante la amplificación del ADN por PCR en los pacientes con UNG.

OBJECTIVE: Mycoplasma genitalium has been associated with nongonococcal urethritis (NGU). Diagnosis by PCR has become the primary detection method for this organism. Thus, diagnosis by DNA amplification using the PCR technique should be utilized. MATERIAL AND METHODS: GMF/GMR and MgpF/MgpR primer pairs, complementary to the M. genitalium 16S rRNA and MgPa genes, respectively, were selected. Specificity and sensibility assays were conducted and clinical samples were studied. RESULTS: The PCR with each primer pair was specific only for M. genitalium, and the sensibility was higher with the GMF/GMR primers. In the study of 34 clinical samples, 18,5 percent were positive for M. genitalium, with more positive samples when the MgpF/MgpR primers were used. CONCLUSIONS: DNA amplification by PCR should be applied in clinical practice to the diagnosis of M. genitalium in patients with NGU should using.

Diagnóstico de Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum y Ureaplasma urealyticum en pacientes con vaginosis bacteriana / Diagnosis of Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum y Ureaplasma urealyticum in patients with bacterial vaginosis

Se realizó un estudio observacional descriptivo, para determinar la frecuencia de aislamientos de Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum y Ureaplasma urealyticum en pacientes con vaginosis bacteriana, donde se incluyeron 296 pacientes con secreción vaginal, atendidas en consultas médicas en 2 hospitales. El diagnóstico se llevó a cabo según los criterios Amsel, y a las mujeres positivas a esta enfermedad se les tomó muestra de exudado endocervical para el diagnóstico por métodos convencionales para M. hominis y Ureaplasma spp. Por la reacción en cadena de la polimerasa se identificaron U. parvum y U. urealyticum. Se diagnosticó vaginosis bacteriana en 30,1 por ciento de las pacientes, y en 77,5 por ciento se detectó la presencia de los micoplasmas urogenitales estudiados. M. hominis fue la especie más frecuente encontrada (71 por ciento), mientras que U. parvum y U. urealyticum se identificaron en 23,2 y 5,8 por ciento, respectivamente. En las mujeres con vaginosis bacteriana se debe realizar el diagnóstico de micoplasmas y ureaplasmas, lo que permitiría instaurar un adecuado control terapéutico, y ayudaría a evitar futuras enfermedades en el tracto genital.

An observational descriptive study to determine the frequency of Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum and Ureaplasma urealyticum isolates in patients with bacterial vaginosis was carried out in 296 patients who had vaginal secretion and were seen at two hospitals. The diagnosis was based on Amsel´s criteria. Endocervical swabs were taken from women positive to this disease for M. hominis and Ureaplasma spp. diagnosis by traditional methods. Polymerase chain reaction identified U. parvum and U. urealyticum. Bacterial vaginosis was diagnosed in 30.1 percent of females, and in 77.5 percent of them the studied urogenital mycoplasmas were present. M. hominis was the most common species (71 percent) whereas U. parvum and Urealyticum were detected in 23.2 percent and 5.8 percent of cases respectively. The diagnosis of Mycoplasmas and ureaplasmas should be performed in females with bacterial vaginosis, which will allow applying adequate therapeutic control and avoiding future pathologies in the genital tract.

Confirmación microbiológica de 2 brotes emergentes de leptospirosis humana en Cuba / Microbiological confirmation of two emergent outbreaks of human leptospirosis in Cuba

Se estudiaron muestras clínicas de 293 pacientes con sospechas de leptospirosis, para la confirmación microbiológica de estos eventos, durante los meses de octubre-diciembre de 2005 cuando se produjeron en Cuba 2 brotes epidémicos en humanos. Se analizaron sueros de pacientes, tanto en la fase aguda como convaleciente, así como hemocultivos realizados antes del comienzo del tratamiento con antibióticos. Para el diagnóstico serológico se emplearon técnicas convencionales (hemaglutinación pasiva y microaglutinación de serogrupos) y de avanzada o de diagnóstico rápido (Lepto tek Dri-Dot, Lepto-Cuba, Látex-India, Lepto tek Lateral Flow). Dentro del brote I se confirmaron por las pruebas serológicas 26 por ciento (22/84) de los individuos estudiados, y a partir de hemocultivos 25 por ciento (5/20), mientras que en el brote II se confirmaron serológicamente 48 casos de 162 estudiados (30 por ciento), y se obtuvo aislamiento de leptospiras en 6 casos de 27 procesados (22 por ciento). Las principales serovariedades encontradas serológicamente fueron Canicola, Ballum, Icterohaemorrhagiae y Pomona. Los métodos de diagnóstico rápido fueron herramientas útiles como pesquisa en los casos más graves o de edad pediátrica. Se confirmó que la causa de los 2 eventos epidemiológicos ocurridos fue la infección por leptospiras patógenas, lo que contribuyó a la toma de medidas higiénico-sanitarias en las 2 provincias.

Clinical samples from 293 patients with suspicion of leptospirosis were studied for the microbiologic confirmation of these events, in October-December 2005, when there were 2 outbreaks in humans, in Cuba. Sera samples of patients in acute phase and during convalescence, as well as hemocultures performed before the beginning of the antibiotic therapy, were analyzed. Conventional techniques (passive hemagglutination test and serogroups hemagglutination), and advanced or fast diagnosis techniques (Lepto tek Dri-Dot, Lepto-Cuba, Latex-India, Lepto tek Lateral Flow) were used for serologic diagnosis. In outbreak I, 26 percent of the studied cases were confirmed by serological tests (22/84), and 25 percent (5/20) through hemocultures; whereas in outbreak II, 48 of the 162 studied cases (30 percent) were serologically confirmed, and it was possible to obtain isolation of leptospires in 6 of the 27 processed cases (22 percent). The main serovariants found by serology were canicola, ballum, icterohaemorrhagiae, and pomona. The rapid diagnosis methods were useful screening tools in the most severe cases or at pediatric ages. The two epidemiologic events were caused by pathogenic leptospires infection, which contributed to the adoption of hygienic-sanitary measures in both provinces.